基于PRLR-JAK-STAT5信号传导通路测定鹅催乳素的新方法

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.07.011

畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (7): 1389-1395.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.07.011

基于PRLR-JAK-STAT5信号传导通路测定鹅催乳素的新方法

宋金委¹，李辉²，陈哲²，施振旦²，王振勇^1*

（1.山东农业大学动物科技学院，泰安 271018； 2.江苏省农业科学院畜牧研究所，南京 210014）

收稿日期:2016-01-07 出版日期:2016-07-23 发布日期:2016-07-23
通讯作者: 王振勇，博士，副教授，E-mail: wzy@sdau.edu.cn
作者简介:宋金委（1989-），女，满族，河北青县人，硕士生，主要从事禽类品种改良和繁育研究，E-mail:915352256@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31372314）；江苏省自然科学基金（BK20130718）

A Novel Method of Detecting Goose Prolactin Based on PRLR-JAK-STAT5 Signal Transduction Pathway

SONG Jin-wei¹，LI Hui2，CHEN Zhe²，SHI Zhen-dan²，WANG Zhen-yong^1*

(1.College of Animal Science and Technology，Shandong Agricultural University，Tai’an 271018，China；2.Institute of Animal Science，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Nanjing 210014，China)

Received:2016-01-07 Online:2016-07-23 Published:2016-07-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在建立鹅催乳素（Goose prolactin，gPRL）的高灵敏度的测定方法。本研究设计出基于PRLR-JAK-STAT5信号通路的荧光素酶报告基因系统。首先克隆鹅PRLR基因CDS区序列，合成信号转导和转录激活因子5 (Signal transducer and activator of transcription 5，STAT5) 信号应答序列，并分别插入真核表达载体pCMV6-Entry和荧光素酶报告载体pGL3-Enhancer中，构建成为信号接收载体和信号应答载体。然后将两载体同筛选基因载体pEZX-MR03及内参载体pRL-TK共转染到HEK293T细胞中，经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染的转基因细胞株。分别用终浓度为0、30、60、90 ng•mL^-1的PRL刺激转基因细胞，通过qRT-PCR和双荧光素酶检测系统测定在不同PRL浓度下转基因细胞株中荧光素酶（Luciferase， Luc）基因的相对表达量和相对活性的变化。筛选出10株成功整合有全部4个转基因载体的转基因细胞株，经过不同浓度PRL刺激后，筛选出一株细胞，其荧光素酶基因表达量和酶活性均表现出随PRL浓度升高而上调的趋势。结果表明，建立的基于PRLR-JAK-STAT5信号传导系统检测鹅PRL生物活性的新方法是可行的，为准确测定家禽PRL奠定基础。

Abstract:

In order to develop a high sensitive method of detecting goose prolactin，luciferase detecting system based on PRLR-JAK-STAT5 signal transduction pathway was designed in the present study.Firstly the CDS region of goose PRLR gene was cloned，the signal transducer and activator of transcription 5（STAT5) was artificially synthesized and inserted into the eukaryotic expression vector pCMV6-Entry and luciferase reporter pGL3-Enhancer plasmid as signal receiver vector and signal responder vector respectively.Secondly，the two recombinant vectors along with puromycin screening vector pEZX-MR03 and internal control pRL-TK vector were transfected into HEK293T cells.After puromycin screening，stable transgenic cell lines were isolated and stimulated by a serial of different concentrations of chicken PRL (0，30，60，90 ng•mL-1).Finally the mRNA relative expression level and enzyme activity of luciferase enzyme were detected by qRT-PCR and dual-luciferase detection system.Results showed that 10 stable transgene cell lines carried the 4 vectors were isolated.After treated with different concentrations of chicken PRL，luciferase gene mRNA expression level was up regulated and luciferase enzyme activity also enhanced in dose dependent manner in one of these 10 cell lines.These results demonstrated that it was feasible of detecting PRL bioactivity using the constructed PRLR-JAK-STAT5 signal transduction system and could be further used in measuring poultry PRL concentrations.

中图分类号:

S835.2

宋金委，李辉，陈哲，施振旦，王振勇. 基于PRLR-JAK-STAT5信号传导通路测定鹅催乳素的新方法[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(7): 1389-1395.

SONG Jin-wei，LI Hui，CHEN Zhe，SHI Zhen-dan，WANG Zhen-yong. A Novel Method of Detecting Goose Prolactin Based on PRLR-JAK-STAT5 Signal Transduction Pathway[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2016, 47(7): 1389-1395.

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参考文献

［1］王锋.动物繁殖学［M］.北京：中国农业大学出版社，2012：53-54.
WANG F.Animal reproduction science［M］.Beijing：China Agricultural University Press，2012：53-54.(in Chinese)
［2］李静，滕卫平.催乳素的免疫调节作用［J］.国外医学内分泌学分册，2000，20(2)：99-101.
LI J，TENG W P.Immune regulation of prolactin［J］.Foreign Medical Sciences Endocrine Section，2000，20(2)：99-101.(in Chinese)
［3］施振旦，陈峰，毕英佐.禽类就巢发生和调控研究进展［J］.黑龙江动物繁殖，2000，8(3)：37-41.
SHI Z D，CHEN F，BI Y Z.Research on regulation of poultry seasonal reproduction［J］.Heilongjiang Journal of Animal Reproduction，2000，8(3)：37-41.(in Chinese)
［4］刘颖，施振旦，黄运茂，等.鸡催乳素和抑制素-α亚基重组蛋白的构建及表达［J］.中国兽医学报，2002，22(4)：365-367.
LIU Y，SHI Z D，HUANG Y M，et al.Construction and expression of recombinant proteins based on chicken prolactin and inhibin α subunit fragment［J］.Chinese Journal of Veterinary Science，2002，22(4)：365-367.(in Chinese)
［5］杨海明.扬州鹅繁殖的光照调控及下丘脑基因差异表达研究［D］.扬州：扬州大学，2014.
YANG H M.Study on light regulation and differential expression of genes in hypothalamus during Yangzhou geese reproductive cycle［D］.Yangzhou：Yangzhou University，2014.(in Chinese)
［6］黄运茂，施振旦.广东地方鹅产蛋—就巢周期调控模式的探讨［J］.黑龙江畜牧兽医，2007(7)：57-58.
HUANG Y M，SHI Z D.Study on the regulation pattern of Guangdong local goose seasonal reproduction［J］.Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine，2007(7)：57-58.(in Chinese)
［7］施振旦，朱基美，黄运茂，等.调节马岗鹅繁殖特性的初步结果和结论［J］.中国草食动物，2001，3(1)：12-15.
SHI Z D，ZHU J M，HUANG Y M，et al.Preliminary results and conclusions of the regulation of the reproductive characteristics of Magang goose［J］.China Herbivores，2001，3(1)：12-15.(in Chinese)
［8］施振旦，黄祖汉.家鸡催乳素放射免疫测定法的建立［J］.核农学报，2000，14(1)：36-39.
SHI Z D，HUANG Z H.Using micro-quantity of chloraminet in chicken prolactin labelling and radioimmunoassay［J］. Acta Agriculturae Nucleatae Sinica，2000，14(1)：36-39.(in Chinese)
［9］DAWSON A，SHARP P J.The role of prolactin in the development of reproductive photorefractoriness and postnuptial molt in the European starling (Sturnus vulgaris)［J］.Endocrinology，1998，139(2)：485-490.
［10］SHI Z D，HUANG Y M，LIU Z，et al.Seasonal and photoperiodic regulation of secretion of hormones associated with reproduction in Magang goose ganders［J］.Domest Anim Endocrinol， 2007，32(3)：190-200.
［11］HUANG Y M，SHI Z D，LIU Z，et al.Endocrine regulations of reproductive seasonality，follicular development and incubation in Magang geese［J］.Anim Reprod Sci，2008，104(2-4)：344-358.
［12］郭日红.鹅催乳素ELISA分析方法的建立［D］.广州：华南农业大学，2013.
GUO R H.Devlopment of enzyme-linked immunoadsorbent assay (ELISA) for measuring goose prolactin［D］.Guangzhou：South China Agriculture University，2013.(in Chinese)
［13］YAMASHITA S，TAKAYANAGI A，SHINIZU N.Temporal and cell-type specific expression of c-fos and c-jun protooncogenes in the mouse uterus after estrogen stimulation［J］.Endocrinology，1996，137(12)：5468-5475.
［14］GOFFIN V，FERRAG F，KELLY P A.Chapter 1 Molecular aspects of prolactin and growth hormone receptors［J］.Adv Mol Cell Endocrinol，1998，2：1-33.
［15］周永明，田胜利，周韶虹，等.骨髓增生异常综合征患者JAK2和STAT5基因表达的变化［J］.临床血液学杂志，2007，20(2)：70-72.
ZHOU Y M，TIAN S L，ZHOU S H，et al.The comparative study on JAK2/STAT5 signal transduction pathway in myelodysplastic syndrome［J］.Journal of Clinical Hematology，2007，20(2)：70-72.(in Chinese)
［16］孙胜利.脑缺血和细胞缺氧/复氧过程中JAK-STAT信号转导相关基因的表达［D］.上海：第二军医大学，2006.
SUN S L.JAK/STAT-related gene expression during transient focal cerebral ischemia/reperfusion and during cell hypoxia/reoxygenation［D］.Shanghai：Second Military Medical University，2006.(in Chinese)
［17］SCHINDLER C，DARNELL J E.Transcriptional responses to polypeptide ligands：the JAK-STAT pathway［J］.Annu Rev Biochem，1995，64：621-651.
［18］ADACHI H，TAKEMOTO Y，BUNGO T，et al.Chicken leptin receptor is functional in activating JAK-STAT pathway in vitro［J］.J Endocrinol，2008，197(2)：335-342.
［19］ROSENBLUM C I，TOTA M，CULLY D，et al.Functional STAT 1 and 3 signaling by the leptin receptor (OB-R)；reduced expression of the rat fatty leptin receptor in transfected cells［J］.Endocrinology，1996，137(11)：5178-5181.
［20］ROSENBLUM C I，VONGS A，TOTA M R，et al.A rapid，quantitative functional assay for measuring leptin［J］.Mol Cell Endocrinol，1998，143(1-2)：117-123.
［21］HEN G，YOSEFI S，RONIN A，et al.Monitoring leptin activity using the chicken leptin receptor［J］.J Endocrinol，2008，197(2)：325-333.
［22］OHKUBO T，HIROTA K，MURASE D，et al.Avian blood induced intranuclear translocation of STAT3 via the chicken leptin receptor［J］.Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol， 2014，174：9-14.

[1]	张克山, 高广亮, 李琴, 赵献芝, 李静, 王启贵. NPFFR1基因对鹅卵泡颗粒细胞激素分泌和细胞凋亡的影响研究[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(10): 2822-2831.
[2]	陈哲, 陈蓉, 闫乐艳, 陈佳彬, 于建宁. 鹅MyoG基因启动子活性及转录调控元件分析[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(7): 1869-1879.
[3]	邓艳, 解广娟, 胡深强, 李亮, 王继文. miR-148a-3p靶向PPARγ基因抑制鹅颗粒细胞孕酮的合成[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(6): 1571-1581.
[4]	王慧芳, 周光现, 孙永峰, 陈新企, 雷栩斌, 张锐毅, 贾汝敏, 赵志辉. 基于全基因组重测序技术的狮头鹅Indel标记分析[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(3): 662-675.
[5]	欧阳宏佳, 孙敬帅, 江丹莉, 潘建秋, 黄运茂. 水禽StAR基因克隆、表达及其对睾丸发育的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2020, 51(12): 3013-3022.
[6]	章杰, 熊子标, 李龙娇, 田旭, 揭晓蝶, 程雅婷, 万堃, 刘安芳, 向邦全, 何航. 不同体重鹅肝脏转录组的功能分析[J]. 畜牧兽医学报, 2020, 51(5): 987-996.
[7]	刘同君, 赵盼, 赵敏孟, 刘龙, 崔恒宓, 龚道清, 耿拓宇. 内质网应激标记基因Grp78参与鹅肥肝免疫/炎症状态的调控[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 727-737.
[8]	刘然，张惠子，云皓琪，陈阳，黄正洋，张扬，徐琪，陈国宏. miRNA-34基因家族进化分析及其在鹅生殖周期内的表达变化[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(2): 260-267.
[9]	汤青萍，宋迟，胡艳，章双杰，赵东伟，邹剑敏. 太湖鹅与皖西白鹅胸肌IGF-I 和MSTN的表达及其与屠宰性状相关性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(2): 204-210.

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